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使用Qubit Flex時讀數(shù)隨時間逐漸降低,最常見的原因是檢測管在儀器內(nèi)持續(xù)受熱。熒光信號對溫度很敏感,溫度升高會使信號減弱。
一、避免樣品在儀器內(nèi)過熱
1、避免反復(fù)讀取:讀數(shù)時,檢測管在儀器內(nèi)會被加熱,導(dǎo)致信號下降。
2、正確做法:如需對同一管樣品進行多次讀取,應(yīng)將檢測管從儀器中取出,在室溫下放置至少30秒,待其冷卻至室溫后再重新測量。
3、縮短上機時間:上機前再拿起管子,盡量縮短手持時間(手溫也會加熱樣品)。
二、確保試劑與樣品處于正確的溫度
1、室溫平衡:確保緩沖液、Qubit試劑和樣本都處于室溫(~25°C)。剛從4°C冰箱取出的緩沖液,即使在室溫放置2-3小時,內(nèi)部可能依然偏冷。
2、避免過熱:剛從離心機取出的樣品,也可能溫度偏高。
三、控制好孵育與檢測時間
1、孵育時間:核酸樣品需孵育2分鐘,蛋白質(zhì)樣品需孵育15分鐘。孵育時間不足可能導(dǎo)致信號不穩(wěn)定。
2、檢測時限:預(yù)混好的樣品需避光保存,并最好在3小時內(nèi)完成檢測。
四、其他注意事項
1、核對程序與試劑盒:確保儀器上選擇的程序與所用試劑盒匹配。
2、檢查試劑與標準品:確保試劑在有效期內(nèi)(通常為6個月),并正確避光保存。
3、檢查檢測管:使用試劑盒推薦的、光學(xué)透明的檢測管,確保管外壁清潔干燥,管內(nèi)無氣泡。
五、Qubit Flex的高光穩(wěn)定性
值得一提的是,Qubit Flex儀器本身具有很高的光穩(wěn)定性。相關(guān)資料顯示,其熒光信號在連續(xù)9次讀取后下降小于0.3%,40次后也僅下降小于2.5%。因此,讀數(shù)下降并非儀器性能問題,主要是由溫度變化導(dǎo)致的。