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使用 Qubit 熒光計時,檢測管液體體積不足主要影響的是最終檢測的總體積,而非樣品本身的體積。Qubit 檢測對最終體積有明確要求,操作不當會導致結果不準或儀器報錯。
一、核心體積要求:總量是關鍵
Qubit 檢測要求檢測管內的最終總體積為 200 µL。這個 200 µL 由兩部分組成:
1、工作液 (Working Solution):通常是 190 µL。
2、樣品 (Sample):體積可以在 1 µL 到 20 µL 之間靈活調整。
3、只要保證最終總體積是 200 µL 即可。例如,你可以加入 1 µL 樣品和 199 µL 工作液,或者 20 µL 樣品和 180 µL 工作液。
二、體積不足的后果
如果檢測管內液體總體積不足 200 µL,主要會導致以下問題:
1、儀器無法正確讀取:Qubit 熒光計的光路系統是針對 200 µL 的液面高度設計的。體積不足會導致光路無法準確穿過樣品,儀器可能報錯或讀數不可靠。
2、結果重復性差:不準確的移液是導致結果重復性差的主要原因之一。
3、讀數隨時間降低:如果液體總量少,更容易受溫度影響,導致讀數不穩定。
三、如何避免體積不足
1、使用校準過的移液器:這是保證加樣體積準確的基礎。
2、嚴格按照說明書操作:不同試劑盒的樣品建議體積可能不同,務必遵循說明書。
3、檢查移液技巧:確保吸頭正確安裝,吸液和排液動作規范,避免產生氣泡。
4、使用合適的檢測管:Qubit 4 使用單管(如貨號 Q32856,500 μL 薄壁管),Qubit Flex 使用 8 聯管(單管容量 200 μL)。使用錯誤或不兼容的管子也可能導致體積判斷失誤。
5、總而言之,Qubit 檢測的成功關鍵在于確保 190 μL 工作液 + 1-20 μL 樣品 = 200 μL 最終總體積。只要掌握這個核心原則,并使用校準過的移液器和正確的檢測管,就能有效避免因體積不足帶來的問題。